triton裂解液怎么配_triton裂解液
1.裂解液ripa加少了会有什么影响
裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂。这两种方法（包括SDS 和溶菌酶处理等）提取纯化DNA中常用的方法。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA 的断裂。
一、机械裂解法主要有以下两中：
1．热休克（Thermal shock），既反复冻溶法，是一种常用的机械裂解方式比，通常由冷冻和解冻两部分组成（freezing and thawing）,。原理：由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。冷冻通常在液氮或-20°C冰上进行，解冻可以在37、50、65 或100℃水浴中进热休克比化学裂解温和，但是很有效，有资料表明用热休克和溶菌酶与SDS的方法获得了90%的细胞裂解率。
2．超声波处理（Ultrasonication）既利用超声加热的方法，把细胞破碎。但这种处理会导致DNA 的断裂，所以加热不宜过剧烈，要设定好超声时间和间隙时间，一般超声时间不超过5秒，间隙时间最好大于超声时间，这些都有利于保护酶的活性。bead-beating 也是常用的机械处理方式，有报道指出bead-beating 比热休克和化学裂解的细胞裂解效果更好 虽然DNA产量较高，但通常得到的DNA片段较小。
二、 化学裂解和酶裂解法（在提核酸时联合使用）
主要是裂解液处理法，细胞裂解液的主要目的有以下几种：（1）利用去污剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白变性使其稳定；（4）抑制蛋白酶活性。
主要根据不同的目的，裂解液的组成有所不同，主要有提取核酸和蛋白两中。在提取RNA或DNA时，我们主要是要充分裂解细胞，得到更多的核酸；如果我们的目的是蛋白，那要根据蛋白的位置、特性等因素考虑裂解液，在提取蛋白后，再根据实验需要复性蛋白等。以下是细胞裂解中常用试剂和其作用：
50 mM Tris-HCl pH 7.4（缓冲体系），150 mM NaCl（等渗体系），1 mM PM （强大的蛋白酶抑制剂），1 mM EDTA（变性剂和稳定剂），5 μg/ml Aprotinin（蛋白酶抑制剂），5 μg/ml Leupeptin（蛋白酶抑制剂），1% Triton x-100（破坏细胞），1% Sodium deoxycholate（中度变性剂和蛋白溶解剂），0.1% SDS（强变性剂和蛋白溶解剂）。7M 尿素，2M硫脲(可以提高膜蛋白的融解），蛋白酶K等。
建议直接买试剂盒提取DNA，简单快速，成功率又高，省得麻烦
裂解液ripa加少了会有什么影响
组织裂解液配方：`
7M Urea(60. 06) 4.2042 g
2M thiourea(76.12) 1.5224 g
100mM DTT 0.1543 g
4% CHAPS 0.4 g
0.5mM EDTA 0.00146 g
40Mm Tris 0.0485 g
2%(v/v) NP-40 0.2 ml
1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml
5mM PM用前加 0.00871 g
2%pharmalyte 0.2ml
共10ml分装成400?l/每管（可应用于30-80毫克组织裂解）
注：已配好分装成400?l/每管可供应用
不需另配！！！
细胞裂解液配方：
6M Urea(60. 06) 1.8018 g
2M thiourea(76.12) 0. 7613 g
65mM DTT 0.050 g
4% CHAPS 0.2 g
40Mm Trisbase 0.02425 g
共5ml分装成200?l/每管（可应用于50-100ml培养瓶内的细胞裂解）
细胞裂解液： 组织裂解液配方：
7 mol/L 尿素、 7M Urea(60. 06) 4.2042 g
2 mol/L硫脲、 2M thiourea(76.12) 1.5224 g
2% NP-40、 2%(v/v) NP-40 0.2 ml
1% Triton X-100、 1%(v/v) Triton X-100 0.1 ml
65 mmol/L DTT、 0.1003g 100mM DTT 0.1543 g
5 mmol/L PM、 5mM PM用前加 0.00871 g
4% CHAPS、 4% CHAPS 0.4 g
40 mmol/L Tris、 40Mm Tris 0.0485 g
2% pharmalyte（pH3-10）、2%pharmalyte 0.2ml
0.5mM EDTA 0.00146 g
25 mg/L DNase I、
7 mg/L RNase A、
20 mg/L aprotinin、
20 mg/L leupeptin、
2 mmol/L Na3VO4、
Phosphatase Inhibitor Cocktail 1
Phosphatase Inhibitor Cocktail 2
1ml水化液配方：
8M Urea(60.06) 0.48048 g
2% CHAPS 0.02 g
痕量溴酚兰 0.4 ?l
1%的痕量溴酚兰（10mg+1000?l双蒸水）
450?l水化液 加DTT 0.00135mg
or 400?l水化液 加DTT 0.00126mg
RIPA裂解液(RIPA
Lysis
Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
RIPA的本意是Radio
Immunoprecipitation
Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。关于不同的RIPA裂解液以及我们生产的其它裂解液的主要特点和差异，以及如何选择裂解液可参考附录。
RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM
Tris(pH
7.4)，150mM
NaCl，1%TritonX-100，1%
sodium
deoxycholate，0.1%
SDS，以及2mM
sodium
pyrophosphate，25mM
β-glycerophosphate，1mM
EDTA，1mM
Na3VO4，0.5
ug/ml
leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。
RIPA裂解液(中)的主要成分为50mM
Tris(pH
7.4)，150mM
NaCl，1%
NP-40，0.5%
sodium
deoxycholate。